PCR, jew reazzjoni katina tal-polimerażi, hija teknika użata biex tkabbar is-sekwenzi tad-DNA.Ġie żviluppat għall-ewwel darba fis-snin tmenin minn Kary Mullis, li ngħata l-Premju Nobel għall-Kimika fl-1993 għax-xogħol tiegħu.Il-PCR irrevoluzzjona l-bijoloġija molekulari, u ppermettiet lir-riċerkaturi jamplifikaw id-DNA minn kampjuni żgħar u jistudjawha fid-dettall.
Il-PCR huwa proċess fi tliet stadji li jseħħ f'ċiklatur termali, magna li tista 'tbiddel malajr it-temperatura ta' taħlita ta 'reazzjoni.It-tliet passi huma denaturazzjoni, ittemprar, u estensjoni.
Fl-ewwel pass, id-denaturazzjoni, id-DNA double-stranded jissaħħan sa temperatura għolja (ġeneralment madwar 95 ° C) biex tkisser ir-rabtiet ta 'l-idroġenu li jżommu ż-żewġ linji flimkien.Dan jirriżulta f'żewġ molekuli tad-DNA single-stranded.
Fit-tieni pass, ittemprar, it-temperatura titbaxxa għal madwar 55 ° C biex tippermetti li l-primers jittempraw mas-sekwenzi komplementari fuq id-DNA single-stranded.Primers huma biċċiet qosra ta 'DNA li huma ddisinjati biex jaqblu mas-sekwenzi ta' interess fuq id-DNA fil-mira.
Fit-tielet pass, l-estensjoni, it-temperatura titla 'għal madwar 72 °C biex tippermetti lit-Taq polymerase (tip ta' DNA polymerase) biex tisintetizza linja ġdida ta 'DNA mill-primers.Il-polimerażi Taq hija derivata minn batterju li jgħix f'molol sħun u kapaċi jiflaħ it-temperaturi għoljin użati fil-PCR.
Wara ċiklu wieħed ta 'PCR, ir-riżultat huwa żewġ kopji tas-sekwenza tad-DNA fil-mira.Billi tirrepeti t-tliet passi għal numru ta 'ċikli (tipikament 30-40), in-numru ta' kopji tas-sekwenza tad-DNA fil-mira jista 'jiżdied b'mod esponenzjali.Dan ifisser li anke ammont żgħir ta 'DNA tal-bidu jista' jiġi amplifikat biex jipproduċi miljuni jew saħansitra biljuni ta 'kopji.
Il-PCR għandu bosta applikazzjonijiet fir-riċerka u d-dijanjostika.Jintuża fil-ġenetika biex tistudja l-funzjoni tal-ġeni u l-mutazzjonijiet, fil-forensika biex tanalizza l-evidenza tad-DNA, fid-dijanjosi ta 'mard infettiv biex tiskopri l-preżenza ta' patoġeni, u fid-dijanjosi prenatali biex tgħarbel għal disturbi ġenetiċi fil-feti.
Il-PCR ġie adattat ukoll għall-użu f'numru ta 'varjazzjonijiet, bħal PCR kwantitattiv (qPCR), li jippermetti li jitkejjel l-ammont ta' DNA u PCR ta 'traskrizzjoni inversa (RT-PCR), li jista' jintuża biex jamplifika s-sekwenzi tal-RNA.
Minkejja l-ħafna applikazzjonijiet tiegħu, il-PCR għandu limitazzjonijiet.Jeħtieġ għarfien tas-sekwenza fil-mira u d-disinn ta 'primers xierqa, u jista' jkun suxxettibbli għal żball jekk il-kundizzjonijiet tar-reazzjoni ma jkunux ottimizzati b'mod korrett.Madankollu, b'disinn u eżekuzzjoni sperimentali bir-reqqa, il-PCR tibqa 'waħda mill-aktar għodod b'saħħithom fil-bijoloġija molekulari.
Ħin tal-post: Frar-22-2023